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綿羊抗人PA(前白蛋白)血清:前白蛋白因其在血漿蛋白電泳分離時(shí)顯示在白蛋白的前方而得名,其半衰期為1.9 d,顯著短于普通白蛋白。前白蛋白起初被發(fā)現(xiàn)的生理功能是作為甲狀腺素和維生素A 的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,近年的一些研究揭示前白蛋白還是一種急性負(fù)時(shí)相反應(yīng)蛋白,在機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)、壞死物質(zhì)清除、組織修補(bǔ)等生理過程中扮演著重要角色,并且在心內(nèi)科疾病的診斷、危險(xiǎn)分層、預(yù)后評(píng)估等方面具有重要作用。
宿主:綿羊
成分:抗血清、防腐劑
純度:免疫電泳法檢測(cè),呈單一沉淀線
穩(wěn)定性:液體-20℃保存2年(避免反復(fù)凍融)
應(yīng)用范圍:酶標(biāo)試劑、免疫比濁試劑、免疫膠乳試劑生產(chǎn)、提取純化抗體、組化實(shí)驗(yàn)中對(duì)應(yīng)抗原,或封閉對(duì)應(yīng)雜抗體,測(cè)定對(duì)應(yīng)抗原濃度,或抗原夾芯法測(cè)定對(duì)應(yīng)抗體,吸收雜抗原成分,層析純化抗原,分析與鑒定對(duì)應(yīng)抗原成分,封閉交叉抗原,測(cè)定對(duì)應(yīng)抗原成分,測(cè)定抗原純度等。
特異性IgG抗體的制備
在標(biāo)記的免疫測(cè)定或其他技術(shù)中將特異性抗體純化出來,是極為重要的。例如在ELISA,用于包被的抗體一定要用特異性IgG,才能得到良好的效果。這是因?yàn)槿逯杏写罅糠强贵w蛋白,如白蛋白、α1和α2球蛋白等,如不除去,會(huì)干擾包被。再如反相間接血凝,致敏紅細(xì)胞的抗體也需用特異性IgG的I(ab')2才能使實(shí)驗(yàn)滿意。特異性IgG和F(ab')2的制備方法有如下幾種。
(一)粗提法提取球蛋白
大多用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。硫酸銨鹽析須經(jīng)過多次沉淀,第一次用40%飽和度,第二次用35%飽和度,第三次用33%飽和度,經(jīng)三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸鈉法更簡(jiǎn)便,用20%即可將γ球蛋白沉淀出來。經(jīng)鹽析后的γ球蛋白雖大多屬于IgG,但還有5%其他區(qū)帶蛋白,如γ區(qū)的雜蛋白。又因IgG組分中還含其他所謂正常的IgG,產(chǎn)生干擾。因此鹽析法粗提的γ球蛋白只能用于一般的實(shí)驗(yàn),或者是抗體效價(jià)較高的抗血清。
(二)離子交換層析法提取IgG
常用的離子交換劑有DEAE纖維素或QAE纖維素,以QAE-Sephadex最為理想,DE22、32、52也可應(yīng)用。取QAE-SephadexA25或A50經(jīng)酸處理并在0.05mol/LpH7.5~8.6的磷酸鹽緩沖液中平衡,將水分抽干,稱濕重Ig加于10ml血清中,在室溫30min后,離心或過濾除去離子交換劑。上清液再如此處理一次,即獲得較純的IgG,甚至不含其他雜蛋白。用該技術(shù)純化IgG簡(jiǎn)便,不損壞抗體,既可小量提取,也可大量制備。
綿羊抗人PA(前白蛋白)血清